Богатый питательными веществами состав среды включает всё необходимое для роста микроорганизмов: витамины, аминокислоты, азот и минеральные соли.
Дифференциация энтеробактерий на среде Клиглера проходит по биохимическим признакам: способности к ферментации лактозы, глюкозы, а также к образованию газа и H2S. Готовая питательная среда позволяет дифференцировать бактерии, вызывающие брюшной тиф (Salmonella typhi) от других видов сальмонелл, а также возбудителя паратифа, бактерию Salmonella paratyphi А от Salmonella schottmuelleri и Salmonella enteritidis.
Феноловый красный в составе готовой питательной среды выступает индикатором кислотности. Он изменяет свой цвет в процессе расщепления углевода с образованием кислот.
Микроорганизмы, не ферментирующие лактозу, такие как сальмонелла и шигелла, сначала образуют желтые колонии на скосе среды. Затем, по мере того, как заканчивается запас декстрозы, в аэробных условиях поверхности скоса питательной среды, реакция меняется на щелочную. Скос среды приобретает красный цвет. Данная реакция не наблюдается в анаэробных условиях основания среды, цвет которого остается желтым.
Под воздействием микроорганизмов, ферментирующих лактозу, среда окисляется. В результате, скос и основание среды окрашиваются в желтый цвет.
Появление трещин в столбике среды свидетельствует о выделении газа. Выделением газа сопровождается рост Citrobacter freundii , Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae, Salmonella enteritidis и некоторых других штаммов.
Тиосульфат натрия и цитрат аммонийного железа - индикаторы сероводорода. В результате реакции, в которую вступает H2S с цитратом железа и тиосульфатом натрия, наблюдается почернение столбика среды.
