Характеристики CLED агара
Агар CLED – неселективная дифференциальная среда для роста и подсчета микроорганизмов мочевых путей. Мясной экстракт и казеин обогащают состав готовой питательной среды CLED витаминами, аминокислотами и минеральным солями, необходимыми для роста бактерий.
Отсутствие хлорида натрия ингибирует обильное разрастание колоний протеев и способствует росту подавляющего большинства бактерий, вызывающих инфекции мочевых путей, поэтому CLED агар используется для их дифференциации и идентификации. Присутствие бактериальных примесей (таких как Diphtheroids, лактобациллы и другие микроорганизмы) указывает на неосторожность при работе с образцом мочи.
Мясной экстракт и казеиновый пептон являются источниками питательных веществ, необходимых для роста микроорганизмов: азота, витаминов, минеральных солей и аминокислот; лактоза – ферментируемый углевод, источник углерода и энергии. L-цистин используется в качестве специальной добавки для роста цистин-зависимых колиформных бактерий. Бромтимоловый синий в составе CLED-агара служит в качестве индикатора кислотности и позволяет отличить бактерии по признаку ферментации лактозы. Организмы, ферментирующие лактозу, понижают уровень рН и изменяют цвет среды с зеленого на желтый.
Микроорганизмы, сбраживающие лактозу, такие как Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, повышают уровень кислотности в среде. Колонии этих бактерий имеют желтый цвет различной степени насыщенности. Микроорганизмы, не ферментирующие лактозу, такие как Proteus vulgaris, образуют колонии зеленого или голубого цвета.
Возбудители инфекций мочевыводящих путей обычно растут обильно и принадлежат только к одному виду. Наиболее часто выделяется Escherichia coli. Посев пробы можно делать методом разведения или посева штрихом на поверхность CLED-агара с помощью калиброванной петли. Сосчитать колонии через 24–48 часов инкубации при температуре 35±2°C. Указать количество колоний в 1 мл мочи. Присутствие колоний в количестве 100000 (105)/мл и более свидетельствует о значительной клинической инфекции мочевых путей.
Состав набора
- Готовая к использованию среда Агар CLED
- Ч0821 упаковка 20 или 100 чашек Петри (90 мм)
- Ф0821 упаковка 6 флаконов по 200мл
Состав CLED агара
|
Лактоза |
10 |
Казеиновый пептон |
4 |
|
Желатиновый пептон |
4 |
Мясной экстракт |
3 |
|
L-цистин |
0,13 |
Бромтимоловый синий |
0,02 |
|
Бактериологический агар |
15 |
|
|
|
Конечная величина pH 7,3±0,2 при 25°C |
|||
Реактивы и материалы не входящие в набор
-
Термостат.
-
Водяная баня.
Образцы
В чашки вносится моча без предварительной подготовки.
Соблюдайте правила транспортировки и хранения образцов.
Проведение анализа при помощи CLED агара
При необходимости подготовки чашек со средой:
-
Ослабьте крышку флакона.
-
Расплавьте агар на водяной бане, оснащенной системой безопасности (около 45 минут).
-
Плотно закройте крышку и перемешайте.
-
Оставьте флаконы при комнатной температуре минимум на 15 секунд, затем перенесите в термостатируемую водяную баню, установленную на 45-50°C. Оставьте на бане при этой температуре вплоть до использования.
-
Перемешайте и разлейте по чашкам (18-20 мл на чашку).
Посев и инкубация:
1. При разливе среды из флаконов, выдержите чашки до достижения комнатной температуры.
2. Засейте чашки сразу после получения образцов.
3. Инкубируйте чашки в перевернутом положении (вверх дном) при 37°C. Необходимо правильно выбрать условия культивирования, в соответствии с действующими рекомендациями и стандартами. Как правило, учет результатов производят через 24-48 часов культивирования.
Регистрация результатов
По окончании инкубации оцените бактериальный рост и внешний вид колоний:
-
Сбраживающие лактозу микроорганизмы: колонии желтого цвета разной степени насыщенности.
-
Не сбраживающие лактозу микроорганизмы: зеленые, голубые или бесцветные колонии.
Для идентификации пользуйтесь биохимическими и/или иммунологическими методами.
Результаты исследований
В исследовании использовали 100 нестерильных образцов мочи. Культивирование вели при 37 Сº. Все образцы дали рост на агаре CLED.
Питательные качества среды:
Из 136 штаммов, выделенных из образцов (энтеробактерии, Pseudomonas, Stenotrophomonas, энтерококки, стафилококки, другие грам(+) бактерии и дрожжи), на среде CLED образовали колонии 132 штамма.
Семьдесят восемь штаммов образовали желтые колонии в результате подкисления среды.
Селективные свойства:
Два из 8 штаммов Proteus образовали расплывшиеся (незначительно) колонии.
Хранение
-
Флаконы с CLED-агаром следует хранить в оригинальной упаковке при 2-8°C до истечения срока годности.
-
Чашки с CLED-агаром следует хранить в оригинальной упаковке при 2-8°C до истечения срока годности.
После вскрытия упаковки хранить не более 2 недель в целлофановом пакете при 2-8°C.
