Агар хромогенный для определения уропатогенных бактерий

Готовая питательная среда позволяет:

Изолировать и подсчитывать все микроорганизмы мочевыводящих путей с использованием стандартной бактериологической петли и чашек с агаризованной средой; по визуально фиксируемой ферментативной активности напрямую подсчитывать бактерии, наиболее часто ответственные за инфекции мочевого тракта: E.coli, Proteus и Enterococci; ориентировочно определять другие патогены, в особенности K.E.S. группу энтеробактерий (Klebsiella, Enterobacter, Serratia).

E.coli определяется по активности двух ферментов:
β-галактозидазы и триптофаназы;
β-галактозидаза разрушает хромогенный субстрат, содержащийся в среде, и окрашивает колонии в розовый цвет;

Proteus характеризуется триптофан дезаминазной активностью;
Proteus mirabilis индол-негативный;
Enterococci продуцируют β-глюкозидазу (эскулиназу), которая разрушает второй хромогенный субстрат, содержащийся в среде, и окрашивая колонии в бирюзово-синий цвет.

Анализируемые образцы

Среда предназначена для работы с любыми типами образцов. Посев производится непосредственно на поверхность агара. Соблюдайте правила транспортировки и хранения образцов.

Проведение анализа

Нанесение на чашки

Используйте стандартную бактериологическую петлю
Держа петлю вертикально, погрузите ее в мочу. Распределите мочу по агару вдоль одного диаметра (1)
Не погружая петлю вторично, начните движение петли сверху вниз зигзагообразным движением перпендикулярно первому мазку.

Инкубирование

Инкубируйте чашку при 37 2С в течение 18 – 24 ч.

Интерпретация результатов

Подсчет
После инкубации в течение 18 –24 ч при 37 °С сравните плотность колоний в верхней половине чашки с рисунком:



Количество, равное 10(4) или менее обычно свидетельствует о контаминации, но должно интерпретироваться в соответствии с количеством лейкоцитов и клинической картиной.
Количество, равное 10(5) или более обычно свидетельствует об инфекции, если проба мочи собрана правильно.

Регистрация результатов

Идентификация микроорганизма основана на цвете колоний.

РОЗОВЫЙ
 β-галактозидазная активность доказывает присутствие E.coli, однако требуется подтверждение продукции индола.
Положительный тест окончательно подтверждает результат первичной идентификации, отрицательный результат требует проведения идентификации обычными методами. Выявление продукции индола.

Для культур, содержащих только один вид микроорганизмов, нанесите одну каплю реагента Ковача на отдельную колонию прямо на агар:

• если цвет реагента изменится на розовый менее чем за 15 секунд, организм индол «+»;
• если реагент не изменяет цвет в течение 15 секунд, организм индол «-».

Для культур, содержащих несколько видов микроорганизмов, проводите этот тест, используя методику, описанную в «Комментариях».

БИРЮЗОВО-СИНИЙ
β-галактозидазная активность: исследуйте культуру под микроскопом.
Кокки, маленькие колонии (0,5 - 1.5 мм в диаметре) яркого бирюзово-синего цвета – энтерококки. Если недостает одной их этих характеристик, проводите идентификацию, используя обычные методы.

СИНЕ-ФИОЛЕТОВЫЙ
β-галактозидазная и β-глюкуронидазная активность: исследуйте культуру под микроскопом.
Бациллы, крупные колонии (2.0 - 3.0 мм в диаметре) сине-фиолетового цвета ориентировочно относятся к группе KES микроорганизмов (Klebsiella, Enterobacter, Serratia) и требует идентификации обычными методами.

ОРАНЖЕВО-КОРЕЧНЕВЫЙ (с изменением в агаре на коричневый)
Триптофан дезаминазная активность (TDA +) свидетельствует о принадлежности организма к группе Proteus-ProvidenciaMorganella.
(Если окрашивание слабое, работа фермента может быть усилена нанесением капли хлорида железа(III) на колонию: за несколько секунд реагент приобретает коричнево-зеленое окрашивание).

Тест на продукцию индола:
Для культур, содержащих только один вид микроорганизмов, нанесите одну каплю реагента Ковача на коричневую колонию:

• если цвет реагента изменится на розовый менее чем за 15 секунд, значит организм: индол «+» Proteus, Providencia или Morganella. Точная идентификация должна проводиться обычными методами.
• если реагент не изменяет цвет в течение 15 секунд, организм индол «-», Proteus mirabilis. Для культур, содержащих несколько видов микроорганизмов, проводите этот тест, используя методику, описанную в «Комментариях».

БЕЛЫЕ ИЛИ БЕСЦВЕТНЫЕ
Идентификация обычными методами.

Профили наиболее часто встречающихся организмов

Бактерии	Колонии	Характеристики
	Цвет	β-галактозидаза	β-глюкозидаза	индол	TDA
E.coli	Розовый	+	-	+	-
Proteus mirabilis	Оранжево-коричневый	-	-	-	+
Индол «+»: Proteus Morganella Providencia	Оранжево-коричневый	-	-	+	+
Энтерококки	Бирюзово-синий	+	-	-	+
K.E.S. энтеробактерии	Сине-фиолетовый	+(-)*	+	+/-	-

* Крайне редко некоторые штаммы группы K.E.S. имеют слабую β-галактозидазную активность: цвет колоний может варьировать между сине-фиолетовым и бирюзово-синим. 

Комментарии

1. β-галактозидаза
Более 99% штаммов E.coli имеют β-галактозидазную активность.
Лишь небольшая часть штаммов других микроорганизмов (не E.coli) продуцируют β-галактозидазу и дают розовые колонии на среде. Часть из них редко встречается при патологии мочеполового тракта (сальмонеллы, шигеллы, стрептококки группы А); другая часть является индол негативной (цитробактер, стафилококки, стрептококки группы В).

2. Лишь малая часть штаммов E.coli является индол-негативной.

3. β-глюкозидаза
Среди стрептококков только энтерококки имеют β-глюкозидазу, что окрашивает колонии в яркий бирюзово-синий цвет.
Слабо голубые колонии кокков не обязательно являются энтерококками и должны исследоваться обычными методами (как правило, это стрептококки групп А и В).
Некоторые штаммы Proteus vulgaris и Providencia rettgery продуцируют β-глюкозидазу.

4. β-галактозидаза + β-глюкозидаза
В основном бактерии группы K.E.S. имеют и β-галактозидазную и β-глюкозидазную активность, а колонии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Однако, некоторые штаммы этой группы могут иметь слабую β-галактозидазную активность и цвет колоний от сине-фиолетового до бирюзово-фиолетового
Citrobacter diversus дает сине-фиолетовые индол-негативные колонии.

5. Каталазный, оксидазный тесты и латексная агглютинация может выполняться напрямую с колоний, изолированных с Уриселект 4.

6. Обычные идентификационные процедуры и тесты антибиотикочувствительности могут проводиться напрямую с колоний, полученных на среде.

7. Индоловая проба для колоний, содержащих более одного микроорганизмы:

Проба Ковача: перенесите 1-3 одинаковых колонии на бумагу для блоттинга.
Добавьте одну каплю реагента Ковача.
Индол-позитивные колонии дают ярко-розовое окрашивание, индол-негативные остаются неокрашеными.

DMACA тест: перенесите1-3 одинаковых колонии на бумагу для блоттинга.
Добавьте одну каплю DMACA реагента.
Индол-позитивные колонии дают бирюзово-синее окрашивание, индол-негативные остаются неокрашенными.

8. Proteus penneri, редко встречающийся организм, является TDA-позитивным и идол-негативным.

9. Во время растворения сухой среды на дне могут оставаться нерастворяющиеся частицы. Их присутствие не влияет на культуральные качества среды.

Хранение

• Чашки с агаром следует хранить в оригинальной упаковке при 2-8°C до истечения срока годности. 
• После вскрытия упаковки хранить не более 2 недель в целлофановом пакете при 2-8°C.

Утилизация отходов

Утилизируйте отходы в соответствии с требованиями, предъявляемыми для утилизации инфекционных материалов. Ответственность за утилизацию несут сотрудники лаборатории.