Бактериологический посев крови – это диагностический метод исследования, применяемый для диагностики бактериемии и фунгемии.
Цели бактериологического посева крови:
- подтверждение инфекционного возбудителя;
- микробная идентификация возбудителя;
- определение антибиотикочувствительности.
Показания к проведению исследования
Основная задача исследования – выявить патогенные микроорганизмы, вызывающие инфекцию кровотока, вызванную бактериями и грибами. Бакпосев назначается пациентам с лихорадкой и ознобом, а также при подозрении на эндокардит или внутрисосудистую инфекцию.
Отбор материала для исследования
Кровь для анализа отбирают из вены в области локтевого сгиба при поступлении больного в стационар до начала антибиотикотерапии, однако если антибиотикотерапия начата - брать кровь следует непосредственно перед приемом следующей дозы антимикробного препарата. Необходимо строго соблюдать правила асептики. Образцы распределяют для нескольких исследований: бактериологического посева на гемокультуру отбирают 5,0 - 10,0 мл крови у взрослых; 2,0 - 5,0 мл у детей; 1,0 - 2,0 мл у новорожденных и детей неонатального периода, остальная взятая кровь распределяется для серологического исследования и приготовления препарата “толстой капли”.
Забранную кровь помещают в специальную пробирку через герметично закрытую пробку и отправляют в лабораторию незамедлительно в специальном контейнере, способном поддерживать температуру 37⁰ C. При невозможности доставки материала быстро в лабораторию кровь, ее необходимо хранить в термостате при температуре 37⁰ C не более 12 часов. Важно исключить случайную контаминацию материала посторонней микрофлорой и не допустить гибели возбудителя с момента взятия материала для анализа и до начала работы с ним в лаборатории.
Как избежать контаминации
Контаминация – загрязнение образца крови при несоблюдении медицинским персоналом правил асептики и антисептики при заборе крови у больного, а также при работе с гемокультурами в лаборатории.
Важно понимать, что наличие контаминации в образце может привести к ложноположительным результатам, что в свою очередь ведет за собой увеличение продолжительности пребывания в стационаре, проведение лишних дополнительных лабораторных исследований и неадекватное использование антибиотиков. Последнее может вызвать появление полирезистентных микроорганизмов, антибиотик ассоциированную диарею или другие неблагоприятные исходы.
Частоту контаминации можно снизить путем следующих правил:
- Перед использованием необходимо подготовить все необходимые расходные материалы, осмотреть флаконы и пробирки на признак повреждения, порчи и истечения срока годности.
- Провести дезинфекцию рук персонала, дезинфекцию флаконов, использовать одноразовые перчатки и маску.
- Необходимо строгое соблюдение правил и методик отбора образцов крови, принятых в вашей медицинской организации.
- До взятия образца необходимо дезинфицировать место венепункции и выждать время экспозиции.
- В случае использования флаконов для анализаторов, первым наполняется аэробный флакон.
Проведение бактериологического посева крови
Питательные среды, используемые для исследования, обычно располагаются в пробирках или чашках Петри. Затем их помещают в термостат, поддерживающий необходимую температуру и влажность для роста микроорганизмов. Культивация может длиться от нескольких дней до двух недель, после чего оцениваются результаты. Выросшие колонии микроорганизмов окрашивают и исследуют под микроскопом.
Для гемокультивирования используются универсальные питательные среды, которые обеспечивают оптимальные условия для роста и размножения широкого спектра микроорганизмов.
Первичный посев крови производится во флаконы с жидкой питательной средой. Сами флаконы, в свою очередь подразделяются на разные типы: для автоматизированных систем и флаконы для ручных методик. Также возможно использование флаконов с “двухфазной” питательной средой, которая отлично подходит для культивирования прихотливых микроорганизмов.
Также, важно отметить, что во избежание недостаточного гемокультивирования количество флаконов с исследуемой кровью от одного пациента должно быть увеличено до 2-6 штук по решению специалиста лаборатории.
Засеянную кровь инкубируют при температуре 37⁰ C в течение 5 суток, при этом ежедневно просматривая на наличие микробного роста. Признаками роста на жидкой питательной среде будет ее помутнение, образование пленки на поверхности среды, наличие осадка, газообразование. При обнаружении роста на жидкой или “двухфазной” питательной среде из крови готовится мазок, окрашенный по Граму. Затем, по результатам микроскопии выполняется посев крови из флакона на плотные питательные среды (среда Эндо, Агар МакКонки, среда Сабуро, элективная солевая среда, шоколадный агар и др.). После изучения роста на плотных питательных средах из выросших колоний готовят мазки для микроскопии, проводят идентификацию выросших культур биохимическими, серологическими или иными методами, после чего определяют чувствительность к антимикробным препаратам.