Антисептики и дезинфицирующие средства являются неотъемлемой частью санитарной безопасности в медицине, пищевой промышленности, фармацевтике и бытовой химии. Их эффективность напрямую влияет на предотвращение инфекций, сохранение стерильности продукции и здоровье потребителей. Поэтому лаборатории контроля качества проводят систематическое тестирование антисептиков, чтобы удостовериться, что они действительно уничтожают патогенные микроорганизмы и соответствуют нормативным требованиям.
Основной задачей такого тестирования является оценка микробицидной активности — способности антисептика или дезинфицирующего средства убивать или подавлять рост микроорганизмов в заданных условиях. Для этих исследований важны правильный выбор микроорганизмов, методов испытаний, условий культивирования и, конечно, питательных сред, которые обеспечивают точность и воспроизводимость результатов.
Нормативные методы и стандарты
Для тестирования антисептиков и дезинфицирующих средств лаборатории ориентируются на международные и национальные стандарты. Они определяют условия испытаний, список тест-культур, продолжительность контакта, способ нейтрализации и метод подсчета выживших микроорганизмов.
Наиболее часто используемые стандарты:
- EN 1276 — оценка бактерицидной активности в жидкой среде;
- EN 1650 — фунгицидные тесты на грибки;
- EN 14476 — вирулицидное действие;
- EN 13697 — поверхностные испытания дезинфектантов;
- ГОСТ 12.1.007-76 — микробиологические методы контроля;
- EN 1040 — базовые бактерицидные тесты суспензионного типа.
Микроорганизмы для тестирования
Выбор тест-штаммов зависит от назначения антисептика и сферы применения. Обычно используют микроорганизмы с известной устойчивостью, которые считаются репрезентативными для патогенной микробиоты:
Бактерии и грибы засевают на среды накопления выращивают в богатых средах до активной вегетативной фазы, а вирусы — на клеточных культурах. Это обеспечивает корректную оценку воздействия антисептика.
Типичные тест-культуры:
- Бактерии: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus hirae;
- Грибы: Candida albicans, Aspergillus niger;
- Вирусы: ротавирусы, энтеровирусы, герпесвирусы — для вирулицидных испытаний; они выращиваются на клеточных культурах (Vero, MDCK и др.) в средах MEM или RPMI-1640.
Организация тестирования
Процесс тестирования обычно включает несколько этапов:
- Разведение тест-культуры до необходимой концентрации.
- Контакт антисептика с микроорганизмом в жидкой среде или на питательном агаре.
- Нейтрализация остаточного действия дезинфицирующего средства.
- Посев на плотную питательную среду для подсчета выживших клеток.
Нейтрализация особенно важна: если остатки антисептика останутся активными, они будут уничтожать клетки уже после завершения теста, и результат окажется недостоверным.
Питательные среды для тестирования антисептиков
Выбор среды зависит от типа микроорганизма и цели теста. Основные типы сред:
Перед тем как приступить к маркерным спискам, важно отметить: среды не только обеспечивают рост микроорганизмов, но и часто включают нейтрализаторы, предотвращающие остаточное действие антисептика. Это критично для точной оценки эффективности средства.
Бактериологические среды:- Трипказо-соевый агар — универсальная среда для подсчета бактерий после воздействия антисептика; поддерживает рост большинства тест-штаммов;
- Мясо-пептонный агар и бульон — применяются для приготовления рабочей суспензии и последующего посева; позволяют выявлять живые бактерии и рассчитывать лог-редукцию;
- Среды с нейтрализующими добавками (Твин-80, лецитин, тиосульфат натрия, гистидин) — нейтрализуют остаточные компоненты дезинфицирующих веществ и их компонентов (например, четвертичные аммониевые соединения, фенолы, перекиси), что обеспечивает корректность результатов.
- Агар Сабуро — богатая углеводами среда для роста дрожжей и плесени (Candida albicans, Aspergillus niger) Агар Сабуро с нейтрализаторами - среда, к составу которой добавляют нейтрализаторы дезинфицирующих средств;
- Бульон Сабуро — для суспензионного тестирования, позволяет оценить выживаемость грибов после обработки антисептиками.
Поскольку вирусы не растут на обычных питательных средах, применяют клеточные культуры (Vero, MDCK) на питательных средах MEM или RPMI-1640; оценивают цитопатический эффект или снижение вирусной активности. Для этих тестов также используют нейтрализаторы в составе среды, чтобы антисептик не повлиял на клетки после контакта с вирусом.
После действия дезинфицирующего средства пробы помещают в бульоны восстановления (Трипказо-соевый бульон, Летиновый бульон, Тиогликолевая среда), содержащие нейтрализаторы, которые позволяют выжившим клеткам восстанавливаться и расти для последующего подсчета, эти среды позволяют точно оценить остаточную микробную нагрузку.
Принципы культивирования
Ключевые условия для тестирования антисептиков:
Перед посевом всегда важно подготовить пробы таким образом, чтобы исключить ложноположительные или ложноотрицательные результаты:
- Инкубация при оптимальной температуре: 35–37 °C для бактерий, 25–30 °C для грибов;
- Анаэробные условия — для тестирования некоторых бактерий (например, Clostridium spp.);
- Контроль времени контакта — строго по методике стандарта;
- Использование нейтрализующих сред — предотвращает разрушение клеток после завершения контакта;
- Возможность серийных посевов — для точного подсчета выживших микроорганизмов и построения графиков лог-редукции.
Соблюдение этих процедур позволяет:
- убедиться в безопасности антисептических и дезинфицирующих препаратов;
- предотвращать распространение патогенов в медицинских, фармацевтических и пищевых производствах;
- минимизировать риски для здоровья персонала и потребителей;
- обеспечить соответствие международным и национальным стандартам качества.